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所属分类:分子生物学平台
RIP检测
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产品描述

RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA 免疫沉淀)是一种用于研究细胞内 RNA 与蛋白质相互作用的技术,通过特异性抗体沉淀目标蛋白质,进而捕获与该蛋白质结合的 RNA,最终分析这些 RNA 的种类和数量。

RIP检测技术服务流程


送样要求

1. 细胞样本

状态要求:

需处于对数生长期(活力>90%),避免细胞凋亡、坏死过多(凋亡细胞会释放核酸酶,降解 RNA)。

若进行药物 / 处理干预,需明确处理时间、浓度等参数,并设置对照组。

数量要求:

常规 RIP 实验:每样本需 5×10⁶ - 2×10⁷个细胞(具体因目标蛋白丰度调整,低丰度蛋白需更多细胞)。

若同时检测多个指标或重复实验,需按倍数增加样本量。

保存与运输:

首选新鲜样本:收集后立即用预冷 PBS 洗涤 2 次,去除培养基残留,离心(300×g,5 分钟)后弃上清,-80℃速冻保存(避免反复冻融)。

运输:使用干冰运输(确保全程低温,避免样本解冻)。

2. 组织样本

取材要求:

新鲜组织需在离体 30 分钟内处理(避免 RNA 降解),用预冷 PBS 冲洗去除血液、杂质,剪成 1-2 mm³ 小块(或直接研磨)。

避免取坏死、纤维化严重的组织(这类组织中 RNA 完整性差,蛋白 - RNA 复合物易解离)。

数量要求:

动物组织:每样本 50-200 mg(如小鼠肝脏约 50 mg/样本,脑组织约 100 mg/样本,具体因组织类型调整)。

植物组织:需去除细胞壁干扰,建议提前用液氮研磨成粉末后保存。

保存与运输:

处理后的组织块或研磨粉末,立即用 RNA 保护剂(如 RNAlater)浸泡(组织体积:保护剂体积 = 1:5-10),或直接液氮速冻后 **-80℃保存 **。

运输:干冰运输,确保样本始终处于冻结状态。

3. 其他样本

体液样本(如血清、脑脊液):需先富集细胞/外泌体(因游离 RNA 易降解,且蛋白-RNA复合物含量低,需大量样本,通常>10 mL)。

细菌/酵母样本:需用相应缓冲液洗涤去除培养基,离心收集菌体,-80℃保存。

实验结果图



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