定量PCR(Quantitative PCR, qPCR),也称实时PCR(Real-time PCR)或者实时定量PCR,是指借助荧光染料或荧光标记的特异性探针,在PCR指数扩增期间实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化,从而对目的基因进行定量分析的PCR检测技术。该技术具有特异性强、灵敏度高、污染途径少、检测方法准确等特点,实现了PCR由定性到定量的飞跃,已成为国际公认的核酸定量的标准方法,广泛应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测等许多领域。
定量PCR(Quantitative PCR, qRCR)技术服务是采用SYBR Green I荧光染料法或TaqMan荧光探针法对DNA/RNA进行相对定量或绝对定量。相对定量:通过2-ΔΔCt法计算比较目的基因和内参基因(常用GAPDH、β-actin和36B4等)的表达倍数差异进行相对定量;绝对定量:需要先制备标准品,然后在检测目的基因的同时检测标准曲线,通过比对标准曲线对未知浓度的样品进行绝对定量,最终计算出样品中特定核酸的拷贝数、摩尔数或者微克数等。
亿奥邦凭借多年的PCR相关试剂盒,特别qPCR试剂盒的研发经验,拥有专业的技术团队,可以针对客户的不同实验目的设计实验方案,提供DNA、mRNA、长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)水平、非编码小RNA(non-coding small RNA, ncsRNA,包括miRNA、piRNA、siRNA、tRF等)相对定量或绝对定量的检测服务,交付真实准确的原始数据和检测报告。
客户仅需提供样品和待检测目的基因的信息,亿奥邦提供从样品处理到最终的检测报告的全程服务。客户无需再担心RNA抽提容易降解、qPCR引物设计不佳、操作不熟练致数据波动性大等一系列问题。
定量PCR技术服务流程
定量PCR技术客户须知
1.样品要求:客户需提供尽量多的新鲜或保存完好的样品:细胞(≥1×106),组织(≥20 mg),血液(≥100μl),DNA样品(≥2μg,OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好),RNA样品(≥2 μg,OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好),反转录的cDNA (≥2μg,纯度在1.9-2.1之间,完整性好)。
2.保存及运输:
a. 对于RNA的定量PCR检测:
组织样品可以液氮速冻后保存于-80ºC,后续样品需用干冰寄送。
细胞样本推荐使用Trizol,细胞收集后加入Trizol保存于-80ºC,后续样品需用干冰寄送。
样品需要注意避免各类污染和反复冻融。
b. 对于DNA的定量PCR检测:组织样品可以液氮速冻后保存于-80ºC,细胞也可以收集后直接保存于-80ºC,后续样品需用干冰寄送。样品需要注意避免各类污染和反复冻融。
3.样品信息:客户必须需提供待检测目的基因的GenBank Accession Number或基因序列。并请尽量提供待检测样品的生物物种信息(如Human、Mouse、Rat等),组织信息,DNA/RNA来源、基因丰度等,这些信息有助于我们快速完成实验设计并完成定量PCR技术服务。
4.实验结果图