细胞迁移(cell migration)，是指细胞在化学信号、物理信号或电信号等的影响下，通过重塑自身细胞骨架和粘附结构，在二维表面或三维环境中发生定向或非定向的位置移动的过程。检测细胞迁移能力，常用的实验方法包括细胞划痕，Transwell迁移实验。细胞侵袭（Cell Invasion），是指细胞不仅具有迁移能力，而且能够主动降解并穿透致密的生理屏障结构（主要是基底膜和细胞外基质），从而侵入并扩散到邻近或远处组织，更能反映体内侵袭过程。检测细胞侵袭能力，最常用实验方法是Transwell侵袭实验，在微孔膜上覆盖基质胶。

细胞迁移/侵袭

1.若为侵袭实验，Transwell膜面加Matrigel。在4℃条件下(冰上操作)将Matrigel胶用无血清的细胞培养基进行稀释。取50-100μl添加到Transwell小室，37℃培养箱中孵育3h凝胶化；

2.取数生长期细胞用0.25%胰酶消化细胞，等待细胞变圆后收集细胞，1000rpm离心3min，离心后弃去上清，用PBS洗1遍，接着用无血清培养基悬浮细胞，调整细胞密度至1×105cells/ml。

3.在24孔板下室加入500μL含10% FBS或趋化因子的培养基，然后用镊子将Transwell小室置于24孔板内，取细胞悬液200μL加入上室，最后放入培养箱中培养24h。

4.细胞固定：用镊子小心取出小室，吸干上室培养基，用棉签轻轻擦拭上室内的细胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL，将小室放入后室温固定30min。

细胞染色：取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl 0.1%结晶紫的孔中，室温染色20min。取出小室，用PBS轻柔清洗2次，除去未与细胞结合的结晶紫。细胞计数：在显微镜下进行观察和拍照，随机选取5个视野(上、下、中央、左、右各1个)计数呈紫色的阳性细胞。

细胞划痕

1.消化对数生长期细胞，计数，1000rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的完全培养基将细胞沉淀吹打成单细胞悬液，接种至6孔板（约5×10⁵细胞/孔，具体可根据细胞的生长快慢调整接种数量），轻拍板壁使分布均匀（避免中间聚集）。放入37℃、5% CO₂培养箱中过夜，使细胞汇合度达90%以上‌。

2.准备10uL的枪和板盖，枪头垂直细胞层划出痕迹，划痕宽度需均匀，建议多孔平行实验以减少误差‌。然后PBS清洗2-3次，去除脱落细胞‌。在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞；反复多次冲洗，尽量洗掉所有的细胞碎片，否则会影响拍照效果。划痕完成后用显微镜照相，作为0h对照。

3.加入无血清或低血清培养基（如1-4% FBS，根据观察时间调整）。若需药物处理来抑制细胞分裂，此时可加入含药培养基‌。放回培养箱，然后在适当的时间点（根据个人实验需要）取出细胞，在显微镜下观察划痕宽度并拍照。每次拍照前用PBS轻洗，拍照时显微镜下固定位置拍摄（建议高低倍镜结合，标记拍照点，同时标记线不要出现在视野内，而是刚好沿着标记线的边拍照），确保数据可比性‌。